Ποσοτικοποίηση Νουκλεϊκών Οξέων σε Φασματοφωτόμετρα
Η ποσοτικοποίηση των νουκλεϊκών οξέων είναι η συχνότερα χρησιμοποιούμενη λειτουργία ενός φασματοφωτομέτρου. Τα ολιγονουκλεοτίδια, μονόκλωνο, δίκλωνο DNA και RNA μπορούν να ποσοτικοποιηθούν σε ρυθμιστικά διαλύματα. Η κορυφή απορρόφησης της υψηλότερης κορυφής απορρόφησης του νουκλεϊκού οξέος είναι 260 nm. Κάθε νουκλεϊνικό οξύ έχει διαφορετική μοριακή σύνθεση και συνεπώς έχει διαφορετικούς συντελεστές μετατροπής. Για να ποσοτικοποιήσετε διαφορετικούς τύπους νουκλεϊνικών οξέων, επιλέξτε τους αντίστοιχους συντελεστές εκ των προτέρων. Για παράδειγμα, η απορρόφηση της 1Οϋ είναι ισοδύναμη με 50 μg / ml dsDNA, 37 μg / ml ssDNA, 40 μg / ml RNA και 30 μg / ml Olig αντίστοιχα. Η τιμή απορρόφησης μετά τη δοκιμή μετατρέπεται με τον παραπάνω συντελεστή για να ληφθεί η αντίστοιχη συγκέντρωση του δείγματος. Πριν από τη δοκιμή, επιλέξτε τη σωστή διαδικασία, εισαγάγετε τους όγκους του αποθέματος διαλύματος και αραιωτικού και δοκιμάστε τα τυφλά και τα δείγματα διαλύματα. Ωστόσο, το πείραμα δεν ήταν εύκολο. Οι ασταθείς αναγνώσεις μπορεί να είναι ο μεγαλύτερος πονοκέφαλος για τους πειραματιστές. Όσο μεγαλύτερη είναι η ευαισθησία του οργάνου, τόσο μεγαλύτερη είναι η εκτεινομένη απορρόφηση απορρόφησης.
Στην πραγματικότητα, η αρχή σχεδιασμού και η αρχή λειτουργίας του φασματοφωτομέτρου επιτρέπουν την αλλαγή της τιμής απορρόφησης μέσα σε ένα ορισμένο εύρος, δηλαδή το όργανο έχει ένα ορισμένο βαθμό ακρίβειας και ακρίβειας. Όπως η ακρίβεια του Eppendorf Biophotometer ≤ 1,0% (1Α). Τα αποτελέσματα αυτών των πολλαπλών δοκιμών ποικίλλουν μεταξύ του μέσου όρου του 1,0% και είναι όλα κανονικά. Επιπλέον, πρέπει επίσης να ληφθούν υπόψη οι φυσικοχημικές ιδιότητες του νουκλεϊνικού οξέος, το ρΗ του ρυθμιστικού διαλύματος για τη διάλυση του νουκλεϊνικού οξέος, η συγκέντρωση ιόντων κλπ. Κατά τη διάρκεια της δοκιμής, η υπερβολική συγκέντρωση ιόντων θα προκαλέσει επίσης την ανάγνωση παρασύρεται ως ΤΕ, η οποία θα σταθεροποιήσει σε μεγάλο βαθμό την ανάγνωση. Η αραιωμένη συγκέντρωση του δείγματος είναι επίσης ένας μη αμελητέος παράγοντας: εξαιτίας της αναπόφευκτης παρουσίας μικρών σωματιδίων στο δείγμα, ειδικά δε των δειγμάτων νουκλεϊκού οξέος. Η παρουσία αυτών των μικρών σωματιδίων παρεμποδίζει το αποτέλεσμα της δοκιμής. Προκειμένου να ελαχιστοποιηθεί η επίδραση των σωματιδίων στα αποτελέσματα των δοκιμών, η απορρόφηση του νουκλεϊνικού οξέος απαιτείται να είναι τουλάχιστον 0,1 Α και η απορρόφηση είναι κατά προτίμηση 0,1-1,5 Α. Σε αυτό το εύρος, δεν πρέπει να υπάρχουν φυσαλίδες στο μίγμα, και δεν υπάρχει αναστολή στο κενό. Διαφορετικά, οι αναγνώσεις παρασύρονται βίαια. πρέπει να χρησιμοποιείται το ίδιο χρωματομετρικό φλιτζάνι για τη δοκιμή του τυφλού και του δείγματος. διαφορετικά, η διαφορά συγκέντρωσης είναι πολύ μεγάλη. ο συντελεστής μετατροπής και η μονάδα συγκέντρωσης του δείγματος είναι οι ίδιοι. Η κυψελίδα φέρεται από το παράθυρο. ο όγκος του δείγματος πρέπει να φθάνει περισσότερο από τον απαιτούμενο ελάχιστο όγκο του κυπέλλου χρώματος κ.λπ.
Εκτός από τη συγκέντρωση νουκλεϊκού οξέος, το φασματοφωτόμετρο δείχνει ταυτόχρονα αρκετές πολύ σημαντικές αναλογίες για να δείξει την καθαρότητα του δείγματος, όπως η αναλογία Α260 / Α280, με σκοπό την εκτίμηση της καθαρότητας του δείγματος, αφού η κορυφή απορρόφησης της πρωτεΐνης είναι 280 nm. Τα καθαρά δείγματα έχουν αναλογία μεγαλύτερη από 1,8 (DNA) ή 2,0 (RNA). Εάν ο λόγος είναι μικρότερος από 1,8 ή 2,0, υποδηλώνει την παρουσία πρωτεϊνών ή φαινολικών ουσιών. Το Α230 υποδεικνύει ότι υπάρχουν μερικές προσμείξεις στο δείγμα, όπως υδατάνθρακες, πεπτίδια, φαινόλες κ.λπ. Η αναλογία του καθαρού νουκλεϊκού οξέος Α260 / Α230 είναι μεγαλύτερη από 2,0. Το A320 ανιχνεύει τη θολότητα του διαλύματος και άλλους παράγοντες παρεμβολής. Το καθαρό δείγμα, το Α320 είναι γενικά 0.
Η εταιρεία ειδικεύεται στην πώληση φασματοφωτομέτρων , ευπρόσδεκτοι πελάτες που έχουν ανάγκη να συμβουλευτούν και να αγοράσουν, θα σας προσφέρουμε ειλικρινή εξυπηρέτηση και ποιοτικά προϊόντα, καθώς και χαμηλότερες τιμές.
Ηλεκτρονικό ταχυδρομείο: info@sumerlab.com
Web: sumerinstrument.com